Skip to content

Choroba Hodgkina z monoklonalnymi i poliklonalnymi populacjami komórek Reeda-Sternberga cd

1 tydzień ago

559 words

Nie uzyskano produktów amplifikacji z pojedynczych wyselekcjonowanych komórek T (ścieżki od 5 do 8) lub buforów zachodzących na siebie (ścieżki 11 i 12). Panel B pokazuje produkty amplifikacji specyficznej dla VH pochodzące z pojedynczych komórek Reeda-Sternberga izolowanych z tkanki od trzech pacjentów z chorobą Hodgkina. W Patencie 6 (ścieżki do 4) wszystkie produkty PCR różniły się długością; w Pacjent 7 znaleziono produkty o identycznej długości (ścieżki 5 i 6) i różne długości (ścieżki 7 i 8), podczas gdy u pacjentów 12 (ścieżki 9 do 12) wszystkie produkty PCR miały tę samą długość. S oznacza standard masy cząsteczkowej i pary zasad bp. Metoda PCR była zdolna do wykrywania identycznych rearanżacji genu Vh w pojedynczych komórkach Raji, hodowli monoklonalnych komórek B (Figura 2A), podczas gdy DNA z pojedynczych komórek HUT102 linii T nie mógł być amplifikowany z primerami genu Vh. Około 60 procent pojedynczych komórek B izolowanych z zamrożonych skrawków hiperplastycznych migdałków i chłoniaka z komórek płaszcza dało produkty PCR. Test PCR ujawnił niepowiązane (poliklonalne) rearanżacje genu Vh w migdałkowych komórkach B i identyczne (klonalne) rearanżacje w komórkach chłoniaka z komórek płaszcza. Pojedyncze komórki T i bufory, które pokrywały zamrożone skrawki podczas procedury izolacji komórek nie dawały produktów amplifikacji (Figura 2A).
PCR i analiza sekwencji pojedynczych komórek izolowanych z tkanek ziarniaka
Materiał analizowany przez PCR z próbek biopsyjnych tkanek dotkniętych chorobą Hodgkina obejmował pojedyncze komórki Reeda-Sternberga zawierające CD30-dodatnie oraz, jako pozytywne i negatywne kontrole, pojedyncze komórki B i komórki T, odpowiednio. Podczas gdy limfocyty T nie dawały produktów amplifikacji, produkty PCR swoiste dla genu Vh otrzymano od 60 do 70 procent komórek B i około 50 procent pojedynczych komórek Reed-Sternberga. Niepowodzenie w uzyskaniu takich produktów od reszty komórek było prawdopodobnie spowodowane użyciem fragmentów tkanek, które często zawierają tylko części jąder, szczególnie w przypadku dużych komórek Reeda-Sternberga. Okazało się niemożliwe zwiększenie wydajności poprzez zwiększenie grubości przekrojów, co tylko obniżyło jakość immunobarwienia i sprawiło, że identyfikacja i izolacja pojedynczych komórek stały się mniej niezawodne.
Tabela 1. Tabela 1. Analiza pojedynczych stroików-komórek Sternberga od 12 pacjentów z klasyczną ziarnicą złośliwą z immunofenotypem komórek B, wykonanych w celu wykrycia przegrupowań genów VH. Produkty PCR genów Vh uzyskano z pojedynczych komórek Reeda-Sternberga wyizolowanych od wszystkich 12 pacjentów z chorobą Hodgkina. Elektroforeza żelowa i analiza sekwencji genów Vh ujawniły trzy wzory (Tabela i Figura 2B). U trzech pacjentów (pacjentów 10, 11 i 12) wszystkie produkty amplifikacji komórek Reeda-Sternberga z danej próbki biopsyjnej miały tę samą długość i sekwencję. U sześciu pacjentów (pacjenci od do 6), długości i sekwencje genów Vh produktów amplifikacji z każdej próbki biopsyjnej różniły się. U pozostałych trzech pacjentów (pacjenci 7, 8 i 9) niektóre produkty PCR miały tę samą długość i sekwencje, podczas gdy inne produkty miały inne. Każdy eksperyment przeprowadzono co najmniej dwukrotnie przez dwie osoby, z identycznymi wynikami w każdym przypadku.
Porównanie sekwencji i tłumaczenie na białko
Porównaliśmy sekwencje genów Vh, które badaliśmy, z sekwencjami linii zarodkowej w banku danych GenBank w celu identyfikacji indywidualnych genów Vh i wnioskowania o obecności mutacji Vh w komórkach Reeda-Sternberga (Tabela 1, a materiał deponowany w National Auxiliary Publications Service [ NAPS])
[więcej w: morfologia krwi cena, endoproteza stawu biodrowego cennik, gościec stawowy objawy ]

Powiązane tematy z artykułem: endoproteza stawu biodrowego cennik gościec stawowy objawy morfologia krwi cena